細胞培養中的“小黑點"是什么?
經常培養細胞的同學們,可能都遇到過上圖的情況,突然有一天,顯微鏡下發現培養基里有為數不少的“小黑點",它們有些知識隨著液體晃動,有些會自主地在液體里迅速或者緩慢地游動。
這些“小黑點",也會被我們的客戶形象地稱為“有黑色的蟲子"。那這些“小黑桿"到底是什么呢?
出現“小黑點"最常見的可能
各類細菌
細菌污染是實驗室細胞培養中常見的污染,即使在細胞培養液中加入了抗菌素,也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌。其中,不乏各類桿狀細菌,在顯微鏡下這些桿菌看起來就像“小黑點"一樣。
培養細胞受細菌污染后,初期細胞仍能生長,但隨著細菌的迅速增殖,會出現培養液變混濁,pH改變從而導致培養基顏色發生變化。隨著污染的加重,細胞發生病理改變,胞內顆粒增多、增粗,后變圓脫落死亡。
出現“小黑點"特殊情況
原蟲為單細胞真核動物,在自然界分布廣泛,種類繁多,約有近萬種為寄生性原蟲,生活在動物體內或體表。
細胞實驗中細胞受到原蟲污染后,培養基輕微渾濁,鏡下可以觀察到眾多的細小點狀物,輕微活動。細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮,在光鏡下觀察??梢姷郊毎思鞍麧{內
出現大小不等的顆?;蚩张?。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養,但在污染初期原蟲的數量少,細胞還能占據優勢,
所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性循環。(對于原蟲的定義,
業內仍然存在一定的討論空間,也有研究者認為原蟲污染屬于細菌類污染)
螨蟲
螨蟲屬于節肢動物門蛛形綱廣腹亞綱的一類體型微小的動物,身體大小一般都在0.5毫米左右,有些小到0.1毫米,大多數種類小于1毫米。世界上已發現螨蟲(mite)有50000多種,僅次于昆蟲。螨蟲污染在細胞系培養中十分少見,
常見于原代培養皮膚成纖維細胞時,形態呈桿狀,能自主直線游動,速度相當快,常常源自實驗動物的毛發中。
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