1.查找待測樣本的蛋白濃度:可以通過NCBI的文獻,uniprot,pax-dab上給出的蛋白表達量參考值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致;
2.試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類:除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細胞上清,和細胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用;
3.試劑盒的檢測范圍:也就是標曲范圍,特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內,對于濃度很高的樣本,可以先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。
4.試劑盒中的稀釋線性及回收率:
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性,是將樣本梯度稀釋下來,看各稀釋梯度濃度是否成線性;參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的最佳稀釋倍數;
b.稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況,加標稀釋線性是將標準品加入樣本中測定加入的標準品濃度測定是否準確;同樣也是確定待測樣本稀釋倍數的參考指標。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適;
5.試劑盒的其它指標:
a.靈敏度:試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的能力,如果待檢指標含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒;
b.板間和板內的變異系數(CV%):反映板內和不同板之間是否均勻,CV%一般小于10% 比較好。
6.試劑盒的有效期:試劑盒的有效期一般是半年至一年,樣本準備時間需要考慮到試劑盒的有效期。
7.試劑盒的特異性:ELISA 試劑盒的特異性與試劑盒的關鍵組分,抗體對有關。若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗。
8.重復性:科學實驗講求重復性,一般 ELISA 試劑盒,其板內和板間變異系數應該控制在 15% 以內。
9.簡便性:試劑盒在保證高質量數據的情況下,實驗時間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標。
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