詳細介紹
Bst 4.0 LowSalt Mix試劑該制品為單一組分的 Mix(2.5 倍濃度),包含了低
濃度緩沖鹽(Low Salt)、Mg
2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA
聚合酶等,使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒
溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板
的聚合酶活性(逆轉錄),還具有依賴于 DNA 的聚合酶活
性,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行恒
溫擴增。
由于 LAMP 在反應時會產生大量的 H+,導致反應體
系 pH 下降(通常由 pH8.8,下降到 7.2 以下),因此,低
緩沖鹽體系條件下,可搭配 pH 敏感染料實現可視化檢測
LAMP 檢測。該制品中包含低濃度 Tris(pH8.8)緩沖鹽,
在搭配 pH 敏感染料的情況下,可進行變色 LAMP 擴增。
除此外,本試劑中不含有甘油,可用于建立凍干體系。
貨 號 名 稱 規格
A3824-01 2.5xBst4.0 LowSalt Mix 1 ml
儲存:-20℃保存 1 年;-80℃保存 2 年;短期使用放置于
2-8℃,保存 1 個月。反復凍融 10 次,不影響使用。如有
白色沉淀,于 37℃水浴放置 10min 后溶解沉淀,不影響
使用。
使用實例(以 LAMP 紅黃變色擴增為例):
1. 搭配使用紅色 pH 指示染料(貨號:A3828-23),進行
LAMP 變色反應。
2. 配制反應體系
2.5xBst4.0 LowSalt Mix 10 μl
10xRed pH Dye 2.5 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
其它注意事項:
(1)該試劑對影響 pH 的緩沖鹽敏感,因此模板中 Tris
鹽、NaOH 等成分對反應有至關重要的影響。在采用核酸
純化的樣本檢測時,推薦使用 ddH2O 進行洗脫。
(2)在使用粗制樣本時建議使用 ddH2O 保存的樣本進行
檢測。在對粗制樣本進行檢測時,最佳的粗制樣本為拭孖
樣本,拭孖樣本經 ddH2O 浸泡后,可以直接使用浸泡液
作為模板進行擴增,無需核酸純化步驟。
(3)關于 DEPC 水使用的特殊說明:由于 DEPC 處理過
的 ddH2O 顯示很強的酸性,會直接導致反應體系變為黃
色。所以 DEPC 處理過的 H2O 必須經 NaOH 溶液調整
pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我們推薦直接使用,水機制
備的 18.2ΩH2O,不影響 RNA 樣本的擴增。
(4)該試劑中不含有甘油組分,因此具有凍干經驗的人
員可進行凍干試劑的開發。
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