詳細介紹
Bst 4.0 HNB Bead試劑為全組分凍干品試劑,包含了標準反應緩沖液、
HNB 染料、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,
使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。
Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶
活性(逆轉錄),還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性,因此
無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行高效的恒溫
擴增。該制品是進行 LAMP 及 RT-LAMP 擴增反應的
試劑。優化的反應體系,確??焖俚耐瓿蓹z測試劑的反應
體系建立。
在 LAMP 擴增起始前 HNB 染料與 Mg2+結合表現出
肉眼可見的紫羅蘭色,當陽性擴增發生時 Mg2+被 LAMP
反應的副產物焦磷酸螯合,HNB 染料無法與 Mg2+結合表
現出肉眼可見的天藍色。由此判斷天藍色為陽性擴增。該
顯色方法受樣本緩沖鹽、pH 等影響較小,適用的樣本較
pH 顯色法通用性更強。
貨 號 名 稱 規格
A3828-04 Bst4.0 HNB Bead 100 個
儲存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個月。
使用凍干微球進行全擴增體系用品的制備方法:將優化的
擴增引物分裝于 0.2 ml EP 管底部,于 70-80℃條件烘干
1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已經含有干燥的擴增引物,
再加入一粒凍干微球即可制備成全擴增體系干燥品,該干
燥品無需冷鏈運輸,可長期保存。
反應體系說明:每一個凍干微球為按照 25 μl 反應體系建
立,在使用時只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可進
行反應。
使用實例:
1. 配制反應體系
在 0.2 ml EP 反應管中加入下述試劑
Bst4.0 HNB Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到液體總量 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
LoopF/B 分別為 8 μM、F3/B3 分別為 2 μM
2. 反應體系配好后,置于65°C進行反應25~45min。肉
眼觀察結果,天藍色為陽性,紫羅蘭色為陰性。
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