詳細介紹
血清中的無機磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-兩種磷酸根陰離子組成,上述陰離子在在不同的pH環
境下能快速相互轉換。在pH7.4血清中兩種磷酸根陰離子濃度比例為1:4;在酸中毒環境下二者濃度約為1:1;在堿中毒環
境下二者濃度比例為1:9;在pH4.5尿液中濃度比例為100:1。WHO推薦的常規檢測方法為比色法,我國衛生部臨檢中心
推薦的常規方法為鉬藍比色法和米吐爾鉬藍比色法。
無機磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍比色法)是先經提純蛋白,利用無機磷與鉬酸銨結合生成磷鉬酸銨,
后者被還原成藍紫色的復合物,通過酶標儀檢測640nm處吸光度,根據公式計算出無機磷含量。本試劑盒僅用
于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
1、取內徑為8mm的玻璃試管2支,分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。
2、靜脈采血1ml,立即取下針頭,沿管壁向各試管注入血液0.5ml,立即混勻并啟動秒表計時,并置于37℃水浴中。
3、每隔10s輕搖試管一次,觀察管內血液流動情況,直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間,即為ACT。
4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。
計算:參考區間: (1.77±0.76)min
4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品,按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1:99的比例配制,使濃度達到60μg/ml,如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,使濃度達到60μg/ml。
注意事項:
1、實驗材料應盡量新鮮,如取材后不立即使用,應存于-20°C.
2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,并蓋緊口。
3、TA滴定液為堿性溶液,有腐蝕性,請小心操作。
4、TA標定液容易長菌,宜4℃保存,一旦發現有絮狀物請棄用。
5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用,可考慮用0.01~0.05M TA滴定液進行滴定。
6、TA滴定液含量計算公式中,V0最好為3次空白測定的平均值。
7、如果所測樣品的濃度過高,應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,并將稀釋倍數帶入公式。
8、如果樣品顏色較深,滴定終點不易觀察,應采用電位滴定法。
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