詳細介紹
核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命的基本物質之一,廣泛存在于所有動植物細胞、微生物體內,根據化學組成不同,核酸可分為脫氧核糖核酸(簡稱DNA)和核糖核酸(簡稱RNA),核酸分子中含有一定比例的磷,DNA中磷含量為9.2%,RNA中磷含量為9.0%
5′-核苷酸檢測試劑盒(過碘氧化法)檢測原理是在強酸條件下,核酸分子中的有機磷轉化為無機磷,后者與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨,隨后還原劑把高價鉬離子還原成低價鉬離子,進而形成藍色的鉬藍,在一定濃度范圍藍色深淺與磷含量成正比,通過分光光度計在660nm處檢測吸光度,通過檢查標準曲線,獲得磷含量,如果待測樣品中有無機磷,應予以扣除,否則結果偏高。該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
1、取內徑為8mm的玻璃試管2支,分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。
2、靜脈采血1ml,立即取下針頭,沿管壁向各試管注入血液0.5ml,立即混勻并啟動秒表計時,并置于37℃水浴中。
3、每隔10s輕搖試管一次,觀察管內血液流動情況,直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間,即為ACT。
4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。
計算:參考區間: (1.77±0.76)min
4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品,按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1:99的比例配制,使濃度達到60μg/ml,如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,使濃度達到60μg/ml。
注意事項:
1、實驗材料應盡量新鮮,如取材后不立即使用,應存于-20°C.
2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,并蓋緊口。
3、TA滴定液為堿性溶液,有腐蝕性,請小心操作。
4、TA標定液容易長菌,宜4℃保存,一旦發現有絮狀物請棄用。
5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用,可考慮用0.01~0.05M TA滴定液進行滴定。
6、TA滴定液含量計算公式中,V0最好為3次空白測定的平均值。
7、如果所測樣品的濃度過高,應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,并將稀釋倍數帶入公式。
8、如果樣品顏色較深,滴定終點不易觀察,應采用電位滴定法。
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