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(AST)檢測試劑盒(賴氏比色法)

簡要描述:(AST)檢測試劑盒(賴氏比色法),雅吉生物是一家生物企業主營ATCC細胞,細胞系,原代細胞和培養試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒

  • 產品型號:TE0133
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-11-01
  • 訪  問  量:161

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詳細介紹

轉氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉換反應的一組酶,氨基轉移酶(ALT)舊稱谷丙(GPT)主要存在于肝細胞漿

內,細胞內ALT濃度遠高于血清,肝細胞破壞后血清ALT立即迅速升高,因此谷ALT被世界衛生組織推薦為肝功能損害最敏感的

檢測指標。


(AST)檢測試劑盒(賴氏比色法)其檢測原理是ALT催化丙氨S與α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應,


二硝基苯肼與α-酮酸反應生成相應的二硝基苯腙,在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異,酶標儀檢測在500~520nm處差

異最大,以等摩爾濃度計算出的生成量,進而計算酶的活性。100T該檢測試劑盒可檢測50個樣本(不含標準品),

該試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

1、蒸餾水

2、離心管

3、水浴鍋或恒溫箱

4、96 孔板、酶標儀

操作步驟(僅供參考):

1、準備樣品:

①血漿、血清樣品:血漿、血清按照常規方法制備,可以直接用于本試劑盒的測定,-20℃

保存 1 個月有效,用于 ALT/GPT 的檢測。

②細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行勻漿,低速離心取上清,-20℃保存 1 個月有效,

用于 ALT/GPT 的檢測。

③(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續計算單

位蛋白重量組織或細胞內的 ALT/GPT 含量。

2、 制作 ALT 標準曲線:取丙酮S標準 1 支,準確加入標準稀釋液 1ml,充分混勻,

即配制成丙酮標準(100mmol/L),4℃保存備用。臨用前,按丙酮標準(100mmol/L):丙

酮S標準稀釋液=1:49 的比例混合,即為丙酮標準工作液-丙酮標準(2mmol/L),以 96

孔板,按下表制備標準曲線,最好設定平行檢測孔,求平均值。

混勻,向各管中加入苯肼顯色液 20ul,混勻,37℃孵育 20min,加入 ALT 顯色基液 200ul,

混勻。室溫放置 5min,以蒸餾水調零,酶標儀 505nm 處讀取各管吸光度。各管吸光度均減

去"0"號管吸光度,所得吸光度差值(縱坐標)與對應的卡門酶活力單位(橫坐標)作圖。注意:

標準品用分光光度計檢測參考值在 0.3~0.9 之間,加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至

棕紅色,應及時檢測,隨著時間的延長其顏色會加深,由于檢測儀器、操作手法等條件的不

同,參考值范圍會有波動。

3、 ALT 加樣:按照下表設置對照孔、測定孔,溶液應按照順序依次加入,并注意避免產生

氣泡。如果樣品中的 ALT 酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。

4、 ALT 測定:混勻,室溫放置 5min,以蒸餾水調零,酶標儀 505nm 處測定對照管、測定

管的吸光度(即為 A 對照、A 測定),如無 505nm 可選擇 500~520nm。

計算:以系列標準孔活力卡門單位為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,以

(A 測定-A 對照)之差值,從標準曲線查得 ALT 活力卡門單位

參考范圍:成年健康人血清 ALT:5~25 卡門單位/ml

注意事項:

1、苯肼顯色液溶解以后,如果仍然有結晶析出,應過濾后使用或棄用。

2、由于賴氏法的特點,在繪制標準曲線時每個點最好做 3 管的重復測定,求出各標準管的

吸光度均值,減去“0"號管吸光度均值,對照賴氏單位繪制標準曲線。

3、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 個月。

4、成批樣本測定時一般無需每份樣本都做自身血清對照,以試劑空白管代替即可。

5、對于超過正常范圍的血清樣本,應該進行復測,復測時每份樣本都應做自身血清對照。

6、嚴重黃疸、脂血或溶血的血清,可能會引起測定管吸光度增高,因此檢測該類樣本時應

做自身血清標本對照。

7、當樣本的酶活力大于 150 卡門單位時,應將樣本進行 5~10 倍稀釋后再行測定。


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