詳細介紹
G5U Plus HiFi PCR Mix試劑G5U Plus High-Fidelity DNA Polymerase, 由分子酶進化平臺(in silico Design & invitro Evolution Workflow
篩選獲得,其融合Q5和Q5U DNA聚合酶的性能于一體,使其成為一酶多用的全能選手。G5U Plus DNA聚合酶來源于高保真
DNA聚合酶,并加入了增強的延伸結構,使其具有長片段擴增、高產、快速擴增能力。強壓力篩選的外切活性區域,
使其具有超保真性能(與Q5同水平),底物活性中心的改造,使其具有dUTP滲入的能力和擴增含尿嘧模板的能力。
G5U Plus DNA聚合酶具有4kb/min以上的延伸速度,可輕松擴增8kb的基因組DNA、20kb的λDNA。
該酶具有5’-3’的聚合酶活性、強3’-5’的外切酶活性,產物為平末端。
許多具有高保真擴增性能的聚合酶來為 B型 DNA 聚合酶,在遇到 DNA 模板中的尿嘧基時停止復制。
G5U Plus刪除了尿嘧結合域,使其能夠讀取和擴增含有尿嘧的模板,該性能賦予其的“U" 特征。
該特征有兩個重要的應用方向:(1)用于超保真擴增重亞硫酸氫鹽轉化、脫氨基、或受損 DNA;(
2)在超保真擴增中搭配dUTP和熱敏UDG,用于防止 PCR 體系中攜帶污染。此外,也多用于USER 克隆。
G5U Plus DNA聚合酶是具有熱啟動功能的版本,由適配體封閉酶活性中心,在反應結束恢復室溫后,
適配體可逆的重新封閉聚合酶。其熱啟動功能確保在25℃以下無活性,高于50℃后迅速恢復100%活性。
熱啟動功能便于室溫建立反應體系、有效的降低低溫下的非特異擴增、提高多重超保真擴增效果,使超保真擴增達到最佳。
主要特征
超保真擴增:與Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能,是載體構建、點突變、NGS模板擴增、基因合成的最佳用酶。
識別dUTP底物:能夠讀取和擴增含有尿嘧的模板,具有“U" 特征。
防污染擴增:在PCR擴增中可以使用dUTP替代dTTP,建立防污染高保真擴增。
快速擴增:具有4kb/min的擴增能力。
長片段擴增:質粒、λDNA 等簡單模板>20 kb,復雜基因組模板>8 kb。
單位定義
一個活力單位即在72°C條件下,30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
儲存
(1)酶儲存液:10mM Tris-HCl,pH7.6,100mM NaCl,0.05% Tween20, 1mM DTT,0.5mM EDTA,50%甘油。
(2)置于-20°C以下,可保存3年。
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