詳細介紹
RAPA HiFi DNA Polymerase(5U/ul)試劑聚合酶,其來源于高保真DNA聚合酶,并加入了增強的延伸結構,使其具有超保真性能(~280倍Taq)
、長片段擴增能力、高產量。長片段擴增能力,使用該酶可輕松擴增8kb的基因組DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。
該酶具有6kb/min以上的延伸速度。該酶具有5’-3’的聚合酶活性、強3’-5’的外切酶活性,產物為平末端。
主要特征
超保真擴增:~280倍Taq的保真性能,是載體構建、點突變、NGS模板擴增、基因合成的最佳用酶。
快速擴增:具有6kb/min的擴增能力。
長片段擴增:質粒、λDNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb,基因組可以有效擴增>8 kb,cDNA可以有效擴增>8kb。
組分
組分名稱500U
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl)100 μl
2xRAPA HiFi Buffer1 ml×5
單位定義
一個活力單位即在在74°C條件下,30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
儲存
長期儲存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于4°C(3個月)保存。
RAPA HiFi DNA Polymerase(5U/ul)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例2:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例3: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例1:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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