詳細介紹
3173 DNA Polymerase(5U/ul))試劑 聚合酶是Taq DNA聚合酶中的一種,其經過基因工程改造的Taq (R660D/F667Y) DNA聚合酶基因。
該DNA聚合酶具有較強的ddNTP的滲入能力,因此其適用于終止法DNA測序或SNP分析。
組分
組分名稱數量
Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl)100 μl
10×Taq FS PCR Buffer1 ml×2
單位定義
一個活力單位即在在74°C條件下,30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
儲存
-20℃可保存3年。
使用方法
按下表配制反應液:
Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl) 0.25 μl
10×Taq FS PCR Buffer 10 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 2 μl
*1模板DNA *X μl
引物F(10 μM) 2 μl
引物R(10 μM) 2 μl
ddH2O Up to 50 μl
*1模板DNA用量參數(50 μl反應體系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μlPCR擴增循環參數
循環數溫度時間
1st Cycle95°C2min
25-35 Cycles95°C20s
Tm20s
72°C1kb/1min
Last Cycle72°C2min
3173 DNA Polymerase(5U/ul))試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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