詳細介紹
6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit試劑全新一代MLV7反轉錄酶為RNase H活性缺失型的聚合酶,并含有的快速合成功能域,其將MLV的反轉錄速度提高了3-4倍
。除此外,MLV7為耐熱型,可耐受50℃ 高溫反應,在60℃ 條件下仍然具有30%以上活性,利于打開RNA二級結構,從而提高
復雜RNA模板的擴增性能。
基于MLV7開發的,采用穩定高效的反轉錄預混體系5×Fast RT MasterMix進行
RNA的反轉錄反應,使用時只需加入模板、引物和RNase Free H2O 即可,大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作
過程中的人為誤差。優化的反轉錄Buffer系統,可以獲得更高產量的cDNA,從而提高后續檢測的靈敏度。合成的第一鏈
cDNA可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴增、Real-Time PCR反應等。
組分
組分名稱數量
5×Fast RT MasterMix400 μl
20XOligo dT(25)&Random Primer100 μl
Rnase Free H2O1 ml×2
注:1.該制品可有效反轉錄mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。
2. 該制品不可反轉錄microRNA。
主要特征
采用全新的MLV7,整個反轉錄過程只需6min
50℃進行反轉錄的MLV反轉錄酶,能更好的轉錄含有復雜高級結構的RNA模板
高效便捷的反轉錄預混體系
反轉錄引物為Random Primer和Oligo dT Primer預混的RT Primer Mix,可更好的合成樣品中的各種cDNA
儲存
請置于-20°C,可保存2年;避免反復凍融。
性能展示
1.時間與產量
以1μg Hela Total RNA作為起始反轉錄模板,分別使用6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit 和傳統反轉錄試劑盒(35min),
對TGFβ、IL-6和GAPDH 3個基因進行qPCR檢測,結果顯示,6min Fast 1 st cDNA Synthesis Kit獲得的cDNA產量與傳統
反轉錄試劑盒相當,無顯著差異.
儲存
2-8℃避光保存,可保存2年。
6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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