詳細介紹
全血microRNA提取試劑盒核酸提取的成功與否、提取質量的好壞對后續實驗起著至關重要的作用。使用TRIzol試劑提取總RNA,對總RNA中包含的部分
小RNA進行研究,該方法的缺點是總RNA中microRNA的比例較小,同時由于mRNA的干擾,會導致后續反轉錄和RealTime
PCR實驗效率很低,很難獲得理想的實驗結果,而且結果并不可靠。在探索miRNA分子功能的過程中開發的全血
miRNA提取試劑盒,通過一步上柱即可獲得純度高達98%的不含大RNA 的miRNA,而且可在45min內完成小RNA的提取。
該miRNA提取試劑盒廣泛適用于凍存和新鮮的抗凝全血樣本(不適用于血清和血漿),每150μl全血可獲得~1μg的microRNA
組分
名稱數量
B1803AB1803B
miRNA Reagent A7.5ml30ml
miRNA Reagent B10ml40ml
miRNA 吸附柱25套100套
RnaseFree TE Buffer5ml5ml
儲存
室溫可保存2年。
全血microRNA提取試劑盒恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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