詳細介紹
UC57 Simple通用克隆載體采用了TOPO酶連接技術,載體預先偶聯上TOPO酶,當加入PCR擴增產物后,5 min就可以完成
連接反應,連接陽性率高。pUC57 Simple TA/平端通用克隆載體試劑消除了大部分的常用酶切位點,便于后續亞克隆。
該產品適用于Taq酶擴增的含“A"尾巴和高保真酶擴增的PCR產物的連接,載體含有氨芐青霉抗性篩選標記。
優勢
快速連接,最快僅需5min;
操作簡單,僅需加入載體和片段即可;
無需藍白斑篩選,陽性率高;
不包含任何酶切位點,便于后續亞克隆。
平末端和A尾產物通用。
注意:引物不能磷酸化。
組分
組分名稱D2401(20T)D2402 (20T)
pUC57 Simple Vector(5 ng/μl)20μl20μl
M13F(-47) (10 μM)100μl100μl
M13R(-47) (10 μM)100μl100μl
RTS DH5α凍干感受態2瓶無
Nano E.coli Transfection Reagent1 ml無
儲存
RTS DH5α凍干感受態在未溶解狀態下,可于-20℃長期保存(>2年),已經溶解后,請-60℃以下保存(3個月)。
pUC57 Simple TA/平端通用克隆載體試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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