詳細介紹
BCA Protein Assay Kit試劑是根據目前常用的蛋白濃度檢測方法之一-BCA(bicinchoninic acid)
法改良研制而成,該試劑盒具有蛋白濃度測定的簡單性,高穩定性,高靈敏度和高兼容性。本試劑盒的原理是蛋白質分子中
的肽鍵結構在堿性環境下能與Cu2+絡合生成絡合物,將 Cu2+還原成Cu+,而BCA試劑可敏感特異地與Cu+結合,
形成穩定的有顏色的復合物,并在562nm處有最大光吸收值,該復合物顏色深淺與蛋白質濃度成正比,可根據吸收值的大小
來測定蛋白的含量,1小時內即可完成蛋白定量檢測。BCA蛋白定量試劑盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作為蛋白質標準溶液
,測定范圍為25~2000 μg/ml。該試劑盒可用于50次試管檢測或500次ELISA板檢測。
組分
組分名稱數量保存
BCA Reagent A100 ml室溫
BCA Reagent B1 ml× 2室溫
BSA 標準品(2 mg/ml)1 ml× 2-20℃
儲存
BCA Reagent A和BCA Reagent B置于室溫保存,BSA蛋白標準品置于-20℃可保存一年。
主要特征
便捷快速:與Lowry法相比,該方法可在1 小時內完成蛋白質定量檢測,工作液配制后24h內使用無影響。
靈敏準確:測定范圍是20~2000 μg/ml(562 nm讀數)。在測定范圍內有良好的線性關系,變異系數小。
兼容性好:與Bradford法相比,對去垢劑耐受能力大為提高,在Tween20低于4%,NP40低于5.0%,SDS低于4%,Triton X-100 低于4%的濃度范圍內,即可獲得準確定量結果(其余物質耐受度詳見說明書)。使用微板法測定時將體積按比例減小。
BCA Protein Assay Kit試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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