詳細介紹
Strep-Tactin XT Resin試劑瓊脂糖凝膠FF 是一種將Strep-Tactin XT共價交聯在瓊脂糖凝膠微球上,形成的生物親和層析分離介質。該純化介質主要用于
純化Strep tag II 或Twin strep tag標簽蛋白。Strep tag II 標簽為8 個氨基酸的小標簽(WSHPQFEK),由于標簽小,
僅為1kDa 左右,一般不影響融合后蛋白質的結構和功能,常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。
由于Strep-Tacin XT對Strep tag II 標簽具有高度特異性,一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。Strep tag II 標簽蛋白與凝膠
結合后可使用脫硫競爭方式進行洗脫,該洗脫方式比較溫和,對蛋白影響極小。 由于Strep-Tactin對Strep tag II
標簽具有很強的吸附能力,在生物的洗脫過程中不易洗脫,造成洗脫效率較低??梢酝ㄟ^在脫硫洗脫液中添加25mM NaOH
來提高蛋白回收效率,而添加NaOH后會造成Strep-Tactin從填料上脫落,進而污染純化蛋白。
本產品為升級的Strep-Tactin XT,其可耐受高濃度的NaOH洗脫(0.5M),除此外Strep-Tactin XT可耐受1%SDS、6M尿素
,因此使用該填料可以在變性條件下純化標簽蛋白。
組分
50%的懸浮液(20%乙醇)。
優勢
Strep-Tactin Resin缺點Strep-Tactin XT Resin優點
(1)常規3mM D-biotin洗脫,洗脫效率較低。(1) 可采用多種洗脫模式;高效的洗脫率,靈活的洗脫條件。
(2)填料再生成本高,需要HABA再生,再生時間長,再生后填料結合能力下降較多,一般難以再生3次以上。(2)方便的填料再生方式,通??芍貜褪褂?0次以上。
(3)不能在變性條件下純化蛋白。(3)可以在變性條件下純化蛋白。
(4)洗脫蛋白中會有殘留脫落的Strep-Tactin蛋白(4)洗脫產物中不含有脫落蛋白,獲得最高純度的蛋白制品。
主要技術指標
基質 4%瓊脂糖凝膠微球PH耐受性 2~13
配基 Strep-Tactin XT耐鹽性 <2M NaCl
配基密度 >5 mg/mlSDS耐受性 <2%
粒徑 45~165 µM(還原劑耐受性 <10mM DTT,<0.1% beta-ME
結合蛋白量 ≥6 mg/ml變性劑耐受性 <6M尿素
儲存
4°C保存,切勿凍存。
Strep-Tactin XT Resin試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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