詳細介紹
SUMO 蛋白酶 試劑也稱為UIP蛋白酶,是一種具有較高活性的半胱酸蛋白酶,來源于酵母編碼的MIP1基因,其特異性識別UBL
蛋白的三級結構-SUMO(Small Ubiquitin-Like Modifier)。SUMO蛋白酶能夠識別完整的SUMO序列,并依賴正確的
蛋白質構象,僅有完整的序列,沒有正確的結構,SUMO酶是不能對目標蛋白進行切割的。因此,該酶是目前切割特異性
好的蛋白酶,可在較廣泛的作用溫度和PH范圍(pH7-9)內發揮作用,切割的最佳溫度為30°C。SUMO蛋白酶的識別序列如下
,切割位點位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRI
QADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG
本公司生產的SUMO蛋白酶含有雙His標簽,酶切后,可通過Ni-NTA Resin親和純化,很容易地將SUMO去除;雙His標簽保證
了,SUMO蛋白酶高親和力的結合Ni-NTA,以最大限度的去除SUMO蛋白酶。該SUMO蛋白酶分子量約26kD。
組分
組分名稱數量
SUMO 蛋白酶(10 U/μl)100 μl
10XSUMO Buffer1 ml
單位定義
在1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C反應1h,剪切>85%的100pmol
底物,所需要的酶量定義為一個活性單位。
儲存
SUMO蛋白酶置于-20°C可保存2年。
SUMO 蛋白酶 試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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