詳細介紹
Thermostable RnaseH試劑來源于極度耐熱菌Thermus thermophilus.,可在較高溫度下特異性地降解雜交到DNA鏈上的RNA磷酸二酯鍵,而DNA鏈保持完整,故能降解RNA/DNA雜交鏈中的RNA鏈。與E.coli Rnase H相比, 該熱穩定Rnase H在25-65°C均具有活性,并且該酶在95°C加熱10min后仍保留全部活性。
由于具有高的熱穩定性,對于需要高溫反應條件的分子生物學應用,熱穩定Rnase H是一個理想的選擇。本制品是經大腸桿菌重組表達純化而得。
單位定義
一單位指50 μl反應體系中,50℃條件下,20min內從40bp的 RNA-DNA雜交鏈中水解出1nmol核糖核酸底物所需的酶量。
儲存
置于-20°C,可保存3年。
Thermostable RnaseH試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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