詳細介紹
凍干品Benzonase核酸酶試劑是一種核酸內切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5‘單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,
單鏈,線狀,環狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,又被稱為“全能核酸酶"。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘
度,去除蛋白樣品中核酸的污染,且無蛋白酶活性殘留,核酸酶活性達1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同
時, 也具有多種其他用途,如:減少了樣品處理時間,增加了蛋白產量,離心時時沉淀和上清分離的更好,更便于溶液的離
心(尤其是超濾);提高色譜純化的效率等。
本公司Benzonase核酸酶包括四種,分別為不含任何標簽的Benzonase核酸酶(科研級別)、無內毒素Benzonase核酸酶、
Strep tagII Benzonase核酸酶(科研級別)和無內毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶,可適應不同下游用途的需求。
其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通過Strep Tactin XT Resin高效去除,而無內毒素的兩種Benzonase核酸酶
,內毒素含量<40EU/mL(按照單位換算量計算為,每1000U中含有的內毒素<0.15EU),可適用于藥用級別的研發和生產。
另外,核酸酶殘留可通過我公司開發的基于 熒光探針的Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒進行評測,15min即可完成檢測,
可檢測到2ng/ml的核酸酶殘留。
用量推薦
實驗類型電泳蛋白樣品制備非藥物蛋白生產藥物蛋白生產疫苗、病毒生產細胞藥物
推薦產品Benzonase(科研級)Benzonase(科研級)
Strep-tagII Benzonase(科研級)Benzonase(無內毒素級)
Strep-tagII Benzonase(無內毒素級)
細胞數量1X106個細胞(10mg組織)1g濕重 (重懸液10mL)1L 發酵上清液1L 培養物
用量125U (0.5 µL)25U/mL(1 µL)25U/mL(1 µL)0.1U/mL(0.4 µL)0.1U/mL(0.4 µL)
推薦用量500U (2 µL)250U/mL(10 µL)250U/mL(10 µL)25U/mL(100 µL)5U/mL(20 µL)
作用時間通常作用時間37℃在15~60min;25℃在30~120min;
單位定義
37℃,pH 8.0反應條件下,在30分鐘內使△A260 值降低1.0(相當于消化37 μg DNA )的酶量定義為一個活性單位。
注意:含大量蛋白、細胞壁、其它鹽分的粗制品,對該酶活性有部分抑制作用,使用時需要增加酶的用量。
應用
蛋白提取時去除核酸污染:在重組蛋白純化或組織細胞樣品蛋白提取時,Benzonase核酸酶可有效降低樣品粘度,利于下游操作
與細胞或細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白質產量
減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象
降解核酸,利于不可溶性蛋白復性前高質量包涵體制備
有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響,改善蛋白質的分離效果,增強2-DE分辨率
疫苗和病毒樣品制備中DNA污染的去除
儲存
置于-20°C,可保存2年
凍干品Benzonase核酸酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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