詳細介紹
T4 GP59 Loader protein試劑T4 噬菌體復制分為依賴于起始子的起始復制和依賴于重組酶的復制。由起始復制產生的3'-ssDNA作為重組復制的第一步鏈侵入
的組份, 該3'-ssDNA被T4 gp32 蛋白所覆蓋,同時將T4 UvsY募集到此;T4 UvsY作為T4 UvsX的loader將其運載至此,
于此同時gp32被置換下來, UvsX和UvsY形成突觸結構, 然后侵入同源的雙鏈形成D-Loop, 一旦形成D-Loop,
UvsX即被置換下來。D-loop被置換鏈作為滯后鏈合成的模板,很快被gp32結合。隨后, 解旋酶loader gp59與gp32覆蓋的
DNA復制叉結合,將gp41/61運載至此, gp61蛋白合成寡核苷酸片段促進滯后鏈DNA的合成,而gp41通過解旋模板而促進先
導鏈的DNA合成。最后,聚合酶的滑板蛋白T4 gp45蛋白和其loder蛋白 gp44/62與先導鏈相結合,促進聚合酶gp43的組裝,
T4 gp45蛋白將gp43運載至復制叉處后啟動先導鏈和滯后鏈的合成,gp44/62隨后從復制叉處解離。因此,
gp59作為解旋酶gp41的loader在gp41引導的DNA先導鏈合成中起到重要作用。
組分
組分名稱100 μg
T4 gp59 Loader Protein (1 μg/μl)100 μl
儲存
-20℃可保存3年。
T4 GP59 Loader protein試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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