詳細介紹
TtDnaG2 Primase試劑Thermoanaerobacter tengcongensis,具有依賴于DNA的RNA聚合酶活性的引發酶(Primase
)。在DNA的復制中它可合成RNA引物,進而引導先導鏈DNA的合成。與野生型TtDnaG 相比,修飾后的TtDnaG2蛋白去除
了其序列特異性識別特性,使得該蛋白在合成RNA Primer過程中對模板無偏好性。該蛋白37~85℃之間都有活性,
最佳反應溫度為70℃,據文獻報道其具有100nt以上的RNA Primer合成能力。
組分
組分名稱50 μg
TtDnaG2 Primase (1 μg/μl)50 μl
儲存
-20℃可保存3年。
Storage Buffer
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
50%甘油
TtDnaG2 Primase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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