詳細介紹
Tth MutS Protein試劑DNA錯配修復系統(MMR)主要由三種蛋白組成,包括MutS、MutL和MutH。其中MutS負責識別錯配或未結合位點并與
之結合,隨后MutL蛋白與MutS-DNA形成復合體,增強其穩定性,并激活MutH的內切酶活性,協同解旋酶和單鏈結合蛋白將
錯配序列切除。 ttMutS蛋白是一種分離自嗜熱棲熱菌(Thermus thermophilus)的DNA錯配修復蛋白,
在最適溫度 65-75℃ 范圍內,該蛋白具有依賴于DNA的ATPase 活性。 ttMutS蛋白在DNA復制中識別錯配堿基和插入堿基形成
的Loop結構,其緊密結合Loop結構從而阻止聚合酶的延伸。因此,其可用于錯配PCR反應(ARMS-PCR)和基因芯片中,
除此外,在基因合成中能阻止錯配的產生,降低基因突變率。
組分
組分名稱50 μg
Tth MutS Protein (1 μg/μl)50 μl
儲存
-20℃可保存3年。
Storage Buffer
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油
Tth MutS Protein試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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