詳細介紹
Tth PrimPol primase試劑是一種DNA介導的RNA/DNA引發酶/聚合酶,即它既具有引發酶的活性有具有DNA聚合酶的活性,因此可啟動體外
RNA/DNA合成、DNA延伸和跨過主治復制的DNA修飾引導先導鏈的不連續合成。Tth PrimPol蛋白來源于嗜熱桿菌T.
thermophilus,該蛋白具有依賴于DNA合成DNA Primer的活性(Primase),識別序列為3’-GTCC-5’,
在鎂離子存在條件下,其可利用ATP或dATP 作為輔酶合成7-9nt的DNA Primer。該蛋白為通過基因重組技術獲得的可溶純性
產物。
組分
組分名稱100 μg
Tth PrimPol Primase (1 μg/μl)100 μl
儲存
-20℃可保存3年。
Storage Buffer
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油
Tth PrimPol primase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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