詳細介紹
T4噬菌體基因32編碼蛋白試劑(T4 gene 32 protein, GP32 Protein)是一種單鏈 DNA(ssDNA)結合蛋白,為T4噬菌體DNA復制和修復所必需。它協調性地結合并穩定瞬時形成的ssDNA區域,在T4 噬菌體DNA復制過程中起著重要的結構性作用。該蛋白也被廣泛地用于穩定和標記ssDNA區域,以便用電子顯微鏡觀察細胞內DNA的結構。最新報道表明T4噬菌體基因32 編碼蛋白可以促進限制性內切酶的消化反應、RT-PCR 中反轉錄的效率、增強T4 DNA聚合酶的活性和提高PCR的產量。
應用
在 RT-PCR 過程中,增加反轉錄的產量和延伸能力
土壤樣品進行 PCR 時,增加目的片段的產量和特異性
穩定和標記 ssDNA 結構
儲存
-20℃可保存3年。
使用注意事項
(1) 該蛋白分子量為33kD。
(2)該蛋白不含有甘油成分,可用于凍干體系建立。
(3)該蛋白的最佳反應溫度為37°C,65°C 20min可使該蛋白失活。
T4噬菌體基因32編碼蛋白試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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