詳細介紹
E.coli SSB單鏈結合蛋白試劑是一種單鏈 DNA(ssDNA)結合蛋白,為E.coli DNA復制和修復所必需。SSB蛋白形成的四聚體特異性
的集合8~16個堿基,從而保護ssDNA免受核酸酶降解。體外實驗表明,該蛋白能穩定DNA的單鏈區域從而松弛DNA的雙鏈區
域,從而增強DNA聚合酶的活性。
組分
組分名稱500 μg
E.coli SSB Protein (2 μg/μl)250 μl
應用
提高 DNA 聚合酶的延伸能力
增加 PCR 反應的產量和特異性
增加 RT-PCR 中,反轉錄的產量和延伸能力
改善強二級結構區域的 DNA 測序
儲存
-20℃可保存3年。
使用注意事項
1. 該蛋白分子量為18.9kD。
2. 該蛋白保存液含50%甘油。
3. 該蛋白的最佳反應溫度為37°C,65°C 20min可使該蛋白失活。
E.coli SSB單鏈結合蛋白試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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