詳細介紹
酵母焦磷酸酶試劑純化自重組 E. coli 菌株,攜帶有從釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝
桿菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 內含肽的融合基因。該焦磷酸酶催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽
:P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸擴增實驗中,其可解除生成的無機焦磷酸鹽對反應體系的抑制。
組分
組分名稱數量
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)200 μl/1 ml
應用
反轉錄反應中提高 RNA 產量
增強 DNA 復制
活性定義
1 單位指標準反應條件下(20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM MgCl2,2mM PPi,25℃ 反應 10 分鐘)每分鐘催化無機焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽所需的酶量。
儲存
-20℃可保存3年。
使用注意事項
(1) 該酶在多種反應Buffer中均具有活性,通常該酶在HDA擴增、LAMP擴增等實驗中,可直接接入即可。
(2) 該酶的用量在不同的實驗中需要優化,通常在0.05~1U/ml濃度調整。
(3) 該酶的最佳反應溫度為25℃,其在16~37℃均有活性,65℃ 10min可使該酶失活。
酵母焦磷酸酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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