詳細介紹
蔗糖磷酸化酶試劑(Sucrose Phosphorylase)屬于糖基水解酶13家族,是一種催化轉移葡萄糖苷鍵的酶,能夠催化蔗糖和無機磷酸
鹽合成1-磷酸-葡萄糖。該酶主要以蔗糖、1-磷酸-葡萄糖為供體,多類物質如多羥基的糖和糖醇、酚羥基、羧基等為受體,
催化合成各種糖苷。該蔗糖磷酸化酶通過重組制備而得,其催化蔗糖(sucrose)的磷酸化反應,生成
D-fructose和α-D-glucose-1-phosphate,反應式為: Sucrose+Pi=α-D-glucose-1-phosphate+D-fructose。
該蔗糖磷酸化酶的比活>100U/mg,該酶通過改造可耐熱,反應溫度可在30~65℃進行,最佳反應溫度為55℃。在60℃孵育
60h后活性損失<30%。
組分
組分名稱數量
Sucrose Phosphorylase (0.5 U/μl)500 μl
活性定義
1單位指在37°C,pH 7.6條件下,每分鐘由蔗糖催化生成1.0 μmole的D-fructose所需的酶量。反應緩沖液為100mM KH2PO4,200mM Sucrose,pH7.6。
儲存
-20℃可保存2年。
蔗糖磷酸化酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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