詳細介紹
ORF1ab LAMP Primer Set試劑在核酸分子的恒溫擴增過程中,無論采用LAMP、CPA等擴增技術,這種高速度的擴增特性,均不可避免的引起假陽性擴增。
這種假陽性的擴增情況在LAMP擴增中表現尤為明顯,由于LAMP擴增用到很高濃度的引物,因此難免保證有少量錯配和引物
Dimer,這些輕微的污染都會導致在LAMP高速擴增中造成假陽性。HaiGene優化的反應緩沖液,配合的顯色技術和陰性
控制技術建立的預混恒溫mix系列產品,可高靈敏度、高特異性的用于LAMP pH變色、橙綠(OG)變色、HNB變色、
SYBR Green熒光檢測。在LAMP擴增實驗中,與其它公司提供的LAMP Mix相比,得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能
,Bst 4.0 Mix具有更快的擴增速度和雜質耐受性。
Bst 4.0 MasterMix及凍干微球系列特點
SYBR GreenHNB變色基于pH指示變色橙綠變色
檢測方法定量PCR或 恒溫熒光儀裸眼觀察裸眼觀察裸眼觀察
顯色染料SYBR GreenHNB染料pH指示染料OG染料
陽性判讀方式擴增曲線天藍色為陽性黃色為陽性綠色為陽性
反應時間15-25min20-35min20-30min15-25min
靈敏度(copies/test)5-25 copies5-50 copies5-50 copies5-50 copies
抗雜質能力強強對樣本ph敏感強
緩沖鹽耐受性強強非常低強
恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
應用實例2:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例3: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
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