詳細介紹
SD DNA Polymerase (10U/ul)試劑是一種新型的Taq DNA聚合酶,該酶具有Bst聚合酶的強烈的鏈置換活性和類似Taq DNA聚合酶的耐熱性。SD DNA 聚合酶可耐受90℃高溫(短暫耐受92℃),且具有5'-3'聚合酶活性、5'-3'鏈置換活性,無外切酶活性,擴增速度2kb/min,最佳反應溫度為70℃,這些特征使得該酶廣泛適用于熱變性PCDR (Polymerase Chain Displacement Reaction)、LAMP反應、長片段擴增、富含GC片段擴增,還可用于全基因組測序(WGA)、單細胞測序和NGS建庫等領域。
SD DN 聚合酶在搭配Taq DNA聚合酶的組合下可進行TaqMan探針的切割,用于qPCDR的擴增。這種qPCDR 的新型方案將槽式PCR的高靈敏特性放置于單管、一步擴增完成,這種檢測策略比qPCR靈敏度高10-100 倍,并且用時更短。
單位定義
1unit指在70°C條件下,30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
應用
等溫擴增、LAMP、熱變性LAMP、tHDA和RCA、PCDR、全基因組測序、單細胞測序、NGS文庫構建。
儲存
-20°C可保存2年。
SD DNA Polymerase (10U/ul)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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