詳細介紹
Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)試劑聚合酶【又名Vent (exo-) DNA 聚合酶】其來源于Thermococcus litoralis,經基因工程改造而得,去除了3′-5′核酸外切酶校讀活性,其保真度有所降低,大約比Taq DNA聚合酶高2倍。該酶在95℃溫育1小時后,仍具有90%以上的聚合酶活性。Tli (exo-) DNA Polymerase 與Vent (exo-) DNA Polymerase性質和使用方法相同,純化自重組E. coli菌株,其攜帶D141A/E143A突變。該產品是高溫雙脫氧終止法測序反應和高產量引物延伸反應的。
主要特征和應用
引物延伸
高溫環狀測序
高溫雙脫氧測序
單位定義
一個活力單位即在在72°C條件下,30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。
儲存
-20℃可保存2年。
Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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