詳細介紹
Western一抗二抗通用稀釋液試劑稀釋液用于做Western blot實驗時一抗或者二抗的稀釋,稀釋液中添加了多種抗體保護劑,可以增加抗體的活性和穩定性,減少抗體的非特異性結合,降低非特異性的背景著色,提高試驗的特異性和靈敏度。用本稀釋液稀釋的一抗或者二抗使用后,可放在4℃或者-20℃保存,并且可以反復多次使用,節約您寶貴的抗體。按照每個一抗稀釋10ml計算,該Western一抗稀釋液可以稀釋10個或10次Western Blot雜交實驗。該制品中不含有抑制熒光顯色或HRP顯色的成分。
儲存
-20℃可保存3年。開始使用后請于4℃保存,有效期為1年。
使用方法
1. 進行一抗孵育雜交 參考所用的一抗說明書,以及樣品中目的蛋白的含量,使用本抗體稀釋液按照適當比例稀釋一抗,如1:1000、1:500等,一抗稀釋后即可直接用于Western blot實驗(室溫孵育雜交1h或4℃雜交過夜)。實驗結束后,可以回收稀釋的一抗,4℃或-20℃ 保存,以用于下次的Western blot實驗。
2. 進行二抗孵育雜交 進行完一抗孵育后,TSBT溶液洗滌膜1~2次,同樣參考二抗說明書,使用本抗體稀釋液,進行二抗的稀釋,并進行二抗的孵育雜交(通常二抗雜交時間為室溫30min即可)。雜交完畢后TBST洗滌膜3~4次,并進行下游顯色。
Western一抗二抗通用稀釋液試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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