詳細介紹
Exonuclease VII試劑來源于大腸桿菌,從 5' -3' 和 3'-5'方向切割單鏈 DNA,對線性或環狀雙鏈 DNA 沒有活性。
當 PCR 完成時,可以使用核酸外切酶 VII 去除寡核苷酸引物,然后再使用不同的引物進行下一步 PCR
。核酸外切酶 VII 消化單鏈 DNA 時,無需金屬離子。 本產品是通過重組表達核酸外切酶 VII 基因(XseA 和 XseB)
而得高純度蛋白。
組分
名稱數量
Exonuclease VII (10 U/μl)25 μl/250 μl
10X Exonuclease VII Buffer1 ml/1 mlx5
單位定義
在 50 μl 反應體系中,37℃ 條件下,30分 鐘內能催化產生 1 nmol 酸溶性核苷酸所需的酶量定義 為一個活性單位。
應用
PCR后去除多余引物
PCR后去除硫代磷酸化寡核苷酸引物
去除雙鏈DNA中的單鏈DNA
1X Exonuclease VII Buffer
50 mM Tris-HCl (pH 8), 50 mM Na3PO4, 8 mM EDTA , 10 mM 2-mercaptoethanol。
熱失活
95℃ 10min
酶保存液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.1M NaCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.
儲存
置于-20°C,可保存2年。
Exonuclease VII試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果,可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。
應用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,在反應結束后,倒置反應管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現出醒目的綠色,陰性表現出橙色,區分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。
應用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(肉眼觀察)
以 體外轉錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起
始前,下圖為 65 度反應 30min 后。
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